Як запобігти утворенню тілець включення?
Вибір умов бактеріальної культури. Зменшення рівня утворення IB можна досягти шляхом зміни умов культивування, включаючи температуру росту, концентрації індукторів і культуральних добавок. Ці фактори часто впливають на швидкість експресії білка та допомагають у процесі згортання білка в E.
Руйнування, промивання та ізоляція тілець включення
- Ресуспендуйте клітинну пасту зі 100 мл культури в 4 мл буфера для ресуспендування.
- Розбийте клітини ультразвуком на льоду (наприклад, 4 × 10 с).
- Центрифугувати на високій швидкості протягом 10 хв при 4 °C.
- Видаліть супернатант і ресуспендуйте осад у 3 мл холодного буфера для виділення.
Тіла включення є крихітні частинки знаходяться у вільному стані та плавають усередині цитоплазматичної матриці. Тому їх також називають цитоплазматичними включеннями. Ці клітинні включення утворюються при зниженні рН і з пулу розчинних білків злиття всередині клітини.
Механізм утворення Коли гени одного організму експресуються в іншому організмі отриманий білок іноді утворює тільця включення.
Після лізису клітин тільця включення можна легко виділити з клітинного лізату центрифугування на низьких обертах протягом 20–30 хв.
Зниження рівня утворення ВБ можна досягти шляхом модифікація умов культивування, включаючи температуру росту, концентрацію індуктора та культуральні добавки. Ці фактори часто впливають на швидкість експресії білка та допомагають у процесі згортання білка в клітинах кишкової палички (табл. 1).
